DIF
Immunofluorescence à double marquage
Immunofluorescence multiplex pour la cytopathologie
Technologie révolutionnaire de marquage par immunofluorescence multiplex conçue spécifiquement pour les échantillons cytologiques – permettant une immunodétection in situ précise, reproductible et optimisée pour l’IA sur une seule lame.
Pourquoi DIF pour la cytopathologie ?
De nombreux prélèvements cytologiques – épanchements séreux, cytologie en milieu liquide (LBC) et cytoponction à l’aiguille fine (FNA) – se présentent naturellement sous forme de suspensions cellulaires, ce qui les rend idéaux pour le marquage par immunofluorescence directe. DIF ne nécessite qu’un petit nombre de cellules cibles, réalisant une immunodétection multiplex du niveau paucicellulaire à unicellulaire.
Compatible paucicellulaire
Détecte 6 à 8 marqueurs sur une seule lame sans nécessiter de préparation de bloc cellulaire.
Préserve la morphologie
Une seule lame permet à la fois l’évaluation morphologique (Pap/H&E) et les immunomarqueurs in situ multiplex simultanément.
Plateforme prête pour l’IA
Les signaux IF numériques s’intègrent parfaitement à la co-localisation par IA et à l’analyse quantitative pour une précision diagnostique supérieure.
Cinq domaines d’application
1. Double marquage p16/Ki-67 en cytologie cervicale
Validation clinique (599 cas LBC) :
Taux de détection de haut grade : 97.1%
Concordance globale avec la LBC : 98.66%
Sensibilité : 95.87%
Spécificité : 95.35%
Amas de cellules en cytologie cervicale – le substrat idéal pour le double marquage DIF
2. Immunodétection multiplex sur lames cytologiques
Exemples cliniques :
Épanchement pleural : la double positivité TTF-1 (vert) + Napsin A (rouge) confirme un adénocarcinome pulmonaire
Cytologie urinaire : panel multiplex HK2 + pan-CK + CD45 pour l’identification des cellules cibles
3. Analyse du microenvironnement immunitaire
Applications :
Profilage du microenvironnement immunitaire tumoral (TIME) à partir d’épanchements séreux
Analyse immunitaire du sang périphérique – sous-typage des lymphocytes T, cellules NK et macrophages
Profilage immunitaire des épanchements séreux associés au cancer rectal
4. Applications basées sur la cytométrie en flux
5. Détection des CTC par immunofluorescence
En vedette · application phare
Comprendre le double marquage p16/Ki-67
La co-expression de p16 et Ki-67 dans une seule cellule révèle une dérégulation du cycle cellulaire indépendamment de la morphologie — un triage objectif basé sur des biomarqueurs recommandé par le Consensus d’experts chinois 2023 sur le double marquage p16/Ki-67.
- Surexprimé lorsque HPV E7 perturbe le cycle cellulaire
- Colore le cytoplasme et le noyau
- Signale les cellules transformées par le HPV
- Exprimé dans toutes les phases actives (G1, S, G2, M)
- Colore uniquement le noyau
- Signale les cellules en division active
- Normalement, p16 et Ki-67 s’excluent mutuellement
- Les deux dans la même cellule = dérégulation du cycle cellulaire
- Une cellule double positive indique fortement une lésion précancéreuse
Pourquoi la fluorescence
Immunofluorescence vs double marquage IHC
Des canaux de fluorescence distincts éliminent le chevauchement des couleurs qui limite l’IHC chromogène, rendant la co-localisation dans la même cellule sans ambiguïté et prête pour l’IA.
Une lame, deux modalités
Flux de marquage & d’imagerie
L’IF est réalisée sur la lame colorée au LBC, de sorte que la morphologie Pap est préservée et qu’aucune lame en double ni bloc cellulaire n’est nécessaire.
Configuration des canaux de fluorescence
Flux diagnostique bimodal assisté par IA
La fusion des caractéristiques en fond clair et en fluorescence réduit efficacement les diagnostics manqués – une lame, deux modalités, une plateforme IA.
Marquage fluorescent basé sur la TSA – haute sensibilité, sans chevauchement chromogène
Flux sur lame unique – détection multiplex sur les lames Pap/H&E existantes
Analyse de co-localisation par IA – élimine les faux positifs dus à la superposition cellulaire
Analyse quantitative in situ – préserve les vraies caractéristiques cellulaires
Aucun bloc cellulaire requis – marquage IF direct sur suspensions cellulaires
Flux numérique de bout en bout – s’intègre aux plateformes PIS et IA de KFBIO
Performances de validation clinique
Validation clinique prospective sur 599 cas cytologiques – le double marquage DIF p16/Ki-67 offre des performances diagnostiques supérieures à la LBC conventionnelle seule.
97.1%
Taux de détection de haut grade
98.66%
Concordance avec la LBC
95.87%
Sensibilité
95.35%
Spécificité
Validation sur 599 cas, par catégorie cytologique
Performances par catégorie du double marquage DIF p16/Ki-67 sur l’ensemble de la série prospective.
Au-delà du dépistage de base
Valeur clinique en pratique courante
- 110 des 217 cas LBC de bas grade étaient IF-positifs — une orientation de suivi plus claire
- Une IF négative réduit en toute sécurité les colposcopies inutiles
- 3 cas LBC surclassés en haut grade corrigés après revue IF
- L’IF est réalisée sur la lame colorée au LBC — aucune lame séparée nécessaire
- Morphologie Pap préservée et intacte
- Corrèle la morphologie aux biomarqueurs sur exactement les mêmes cellules
- Ne nécessite que quelques cellules cibles
- Idéal pour les prélèvements LBC qui sont des suspensions cellulaires naturelles
- Aucune préparation de bloc cellulaire ; sensibilité de détection unicellulaire
Co-localisation par IA dans la plateforme KFBIO
Plateforme de pathologie numérique KFBIO – à gauche : coloration Pap en fond clair (ASC-US) ; à droite : IF multiplex en fluorescence (DAPI/Ki-67/P16) avec co-localisation par IA
La plateforme d’immunofluorescence multiplex optimale pour la cytologie
Propulsé par l’écosystème de pathologie numérique de bout en bout de KFBIO – de la préparation des échantillons à l’analyse par IA.
Une solution intégrée
Scanner, logiciel et réactifs — de bout en bout
KFBIO fournit le flux complet p16/Ki-67 in situ sur LBC : un scanner fond clair + fluorescence, la plateforme de co-localisation par IA et des réactifs de double marquage validés.
- Fond clair + jusqu’à 10 canaux de fluorescence
- Numérisation lame entière à haute vitesse
- Capacité de 120 lames (extensible à 480)
- Sorties KFB / DCM / TIFF / SVS / QPTIFF
- Détection & classification cellulaire sur tous les canaux
- Co-localisation p16/Ki-67 dans la même cellule
- Segmentation des amas cellulaires
- Rapports objectifs et quantitatifs
- Optimisé pour la cytologie en milieu liquide
- Compatible avec les lames colorées au Pap
- p16-FITC + Ki-67-Cy3 + DAPI
- Protocole standardisé, 599+ cas validés
