DIF
Inmunofluorescencia de doble tinción
Inmunofluorescencia multiplex para citopatología
Tecnología revolucionaria de tinción por inmunofluorescencia multiplex diseñada específicamente para muestras citológicas, que permite una inmunodetección in situ precisa, reproducible y optimizada para IA en una sola laminilla.
¿Por qué DIF para citopatología?
Muchas muestras citológicas -derrames serosos, citología en base líquida (LBC) y punción-aspiración con aguja fina (PAAF)- se presentan naturalmente como suspensiones celulares, lo que las hace ideales para la tinción por inmunofluorescencia directa. DIF requiere solo un pequeño número de células diana, logrando inmunodetección multiplex desde el nivel paucicelular hasta el unicelular.
Compatible con muestras paucicelulares
Detecta de 6 a 8 marcadores en una sola laminilla sin necesidad de preparar un bloque celular.
Preserva la morfología
Una sola laminilla admite simultáneamente la evaluación morfológica (Pap/H&E) y los inmunomarcadores in situ multiplex.
Plataforma lista para IA
Las señales de IF digital se integran perfectamente con la co-localización por IA y el análisis cuantitativo para una precisión diagnóstica superior.
Cinco fronteras de aplicación
1. Doble tinción p16/Ki-67 en citología cervical
Validación clínica (599 casos LBC):
Tasa de detección de alto grado: 97.1%
Concordancia global con LBC: 98.66%
Sensibilidad: 95.87%
Especificidad: 95.35%
Agrupaciones celulares en citología cervical: el sustrato ideal para la doble tinción DIF
2. Inmunodetección multiplex en laminillas citológicas
Ejemplos clínicos:
Derrame pleural: la doble positividad TTF-1 (verde) + Napsina A (rojo) confirma adenocarcinoma de pulmón
Citología de orina: panel multiplex HK2 + pan-CK + CD45 para la identificación de células diana
3. Análisis del microambiente inmunitario
Aplicaciones:
Perfil del microambiente inmunitario tumoral (TIME) a partir de derrames serosos
Análisis inmunitario de sangre periférica: subtipificación de linfocitos T, células NK y macrófagos
Perfil inmunitario de derrames serosos asociados a cáncer rectal
4. Aplicaciones basadas en citometría de flujo
5. Detección de CTC por inmunofluorescencia
Destacado · aplicación insignia
Comprender la doble tinción p16/Ki-67
La coexpresión de p16 y Ki-67 en una sola célula revela una desregulación del ciclo celular independiente de la morfología — un triaje objetivo basado en biomarcadores recomendado por el Consenso de expertos chino 2023 sobre la doble tinción p16/Ki-67.
- Sobreexpresado cuando HPV E7 altera el ciclo celular
- Tiñe tanto el citoplasma como el núcleo
- Señala células transformadas por HPV
- Expresado en todas las fases activas (G1, S, G2, M)
- Tiñe solo el núcleo
- Señala células en división activa
- Normalmente p16 y Ki-67 son mutuamente excluyentes
- Ambos en la misma célula = desregulación del ciclo celular
- Una célula doble positiva indica fuertemente una lesión precancerosa
Por qué la fluorescencia
Inmunofluorescencia vs doble tinción IHC
Los canales de fluorescencia separados eliminan la superposición de colores que limita la IHC cromogénica, haciendo que la co-localización en la misma célula sea inequívoca y lista para IA.
Una laminilla, dos modalidades
Flujo de tinción & obtención de imágenes
La IF se realiza sobre la laminilla teñida con LBC, por lo que se preserva la morfología Pap y no se requiere una laminilla duplicada ni un bloque celular.
Configuración de canales de fluorescencia
Flujo diagnóstico bimodal asistido por IA
La fusión de características de campo claro y fluorescencia reduce eficazmente los diagnósticos omitidos: una laminilla, dos modalidades, una plataforma de IA.
Marcaje fluorescente basado en TSA: alta sensibilidad, sin superposición cromogénica
Flujo de una sola laminilla: detección multiplex en laminillas Pap/H&E existentes
Análisis de co-localización por IA: elimina falsos positivos por superposición celular
Análisis cuantitativo in situ: preserva las verdaderas características celulares
Sin bloque celular: tinción IF directa sobre suspensiones celulares
Flujo digital de extremo a extremo: se integra con las plataformas PIS e IA de KFBIO
Rendimiento de validación clínica
Validación clínica prospectiva de 599 casos citológicos: la doble tinción DIF p16/Ki-67 ofrece un rendimiento diagnóstico superior al de la LBC convencional por sí sola.
97.1%
Tasa de detección de alto grado
98.66%
Concordancia con LBC
95.87%
Sensibilidad
95.35%
Especificidad
Validación de 599 casos, por categoría citológica
Rendimiento por categoría de la doble tinción DIF p16/Ki-67 en toda la serie prospectiva.
Más allá del cribado básico
Valor clínico en la práctica habitual
- 110 de 217 casos LBC de bajo grado fueron IF-positivos — orientación de seguimiento más clara
- Una IF negativa reduce de forma segura las derivaciones innecesarias a colposcopia
- 3 casos LBC sobreclasificados como alto grado corregidos tras la revisión IF
- La IF se realiza sobre la laminilla teñida con LBC — sin necesidad de una laminilla separada
- Morfología Pap preservada e intacta
- Correlaciona la morfología con los biomarcadores en exactamente las mismas células
- Solo necesita unas pocas células diana
- Ideal para muestras LBC que son suspensiones celulares naturales
- Sin preparación de bloque celular; sensibilidad de detección unicelular
Co-localización por IA en la plataforma KFBIO
Plataforma de patología digital KFBIO – izquierda: tinción Pap en campo claro (ASC-US); derecha: IF multiplex en fluorescencia (DAPI/Ki-67/P16) con co-localización por IA
La plataforma óptima de inmunofluorescencia multiplex para citología
Impulsado por el ecosistema de patología digital de extremo a extremo de KFBIO, desde la preparación de la muestra hasta el análisis por IA.
Una solución integrada
Escáner, software y reactivos — de extremo a extremo
KFBIO ofrece el flujo completo p16/Ki-67 in situ en LBC: un escáner de campo claro más fluorescencia, la plataforma de co-localización por IA y reactivos de doble tinción validados.
- Campo claro + hasta 10 canales de fluorescencia
- Escaneo de laminilla completa a alta velocidad
- Capacidad para 120 laminillas (ampliable a 480)
- Salidas KFB / DCM / TIFF / SVS / QPTIFF
- Detección & clasificación celular en todos los canales
- Co-localización p16/Ki-67 en la misma célula
- Segmentación de agrupaciones celulares
- Informes objetivos y cuantitativos
- Optimizado para citología en base líquida
- Compatible con laminillas teñidas con Pap
- p16-FITC + Ki-67-Cy3 + DAPI
- Protocolo estandarizado, 599+ casos validados
